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　　第３ ０ 卷第３ 期２０ ０ ９ 年９ 月内蒙古农业大学学报Ｊｏ ｕ ｒｎ ａ ｌｏ ｆ Ｉｎ ｎ ｅ ｒＭ ｏ ｎ ｇ ｏ ｌｉａＡ ｇ ｒ ｉｃ ｕ ｌｔｕ ｒ ａ ｌＵ ｎ ｉｖ ｅ ｒ ｓｉｔｙＶ ０ １． ３０Ｎ ｏ ． ３Ｓ ｅ ｐ ． ２ ０ ０ ９鲫鱼尾鳍细胞培养及冻存与复苏的初步研究’孟凡华１， 狄栋栋１， 黄凯２（ １．内蒙古农业大学生物工程学院， 呼和浩特０１００１８； ２．内蒙古必威安泰生物科技有限公司， 北京１０ ２６０ ０ ）摘要：本文主要从鱼类种质资源保存的目的出发， 一方面以鲫鱼尾鳍组织为材料， 进行细胞培养， 并对所获得的原代和传代细胞进行形态学观察； 另一方面以传代细胞为材料， 采用逐步降温法和悬于液氮罐口两种方法冻存细胞，每种方法均以甘油和Ｄ Ｍ Ｓ Ｏ 为冻存剂， 通过计算复苏率， 找到最适宜的冻存方法与冻存剂。 实验结果： 成功培养了鲫鱼尾鳍细胞， ...

　　第３ ０ 卷第３ 期２０ ０ ９ 年９ 月内蒙古农业大学学报Ｊｏ ｕ ｒｎ ａ ｌｏ ｆ Ｉｎ ｎ ｅ ｒＭ ｏ ｎ ｇ ｏ ｌｉａＡ ｇ ｒ ｉｃ ｕ ｌｔｕ ｒ ａ ｌＵ ｎ ｉｖ ｅ ｒ ｓｉｔｙＶ ０ １． ３０Ｎ ｏ ． ３Ｓ ｅ ｐ ． ２ ０ ０ ９鲫鱼尾鳍细胞培养及冻存与复苏的初步研究孟凡华１， 狄栋栋１， 黄凯２（ １．内蒙古农业大学生物工程学院， 呼和浩特０１００１８； ２．内蒙古必威安泰生物科技有限公司， 北京１０ ２６０ ０ ）摘要：本文主要从鱼类种质资源保存的目的出发， 一方面以鲫鱼尾鳍组织为材料， 进行细胞培养， 并对所获得的原代和传代细胞进行形态学观察； 另一方面以传代细胞为材料， 采用逐步降温法和悬于液氮罐口两种方法冻存细胞，每种方法均以甘油和Ｄ Ｍ Ｓ Ｏ 为冻存剂， 通过计算复苏率， 找到最适宜的冻存方法与冻存剂。 实验结果： 成功培养了鲫鱼尾鳍细胞， 现已传至第７ 代； 细胞在传代过程中呈成纤维细胞增多的趋势； 采用逐步降温法和使用Ｄ Ｍ Ｓ Ｏ 为冻存剂细胞复苏率较高。关键词：鲫鱼； 尾鳍；细胞培养； 冻存文献标识码： Ａ中图分类号： ￥ ９ ６５． １１７文章编号： １０ ０ ９ ３５７ ５（ ２０ ０ ９ ）０ ３０ ２３８ ０ ３Ｃ Ａ Ｒ ＰＴ Ａ Ｌ Ｌ Ｆ ＩＮＴ ＩＳ Ｓ Ｕ ＥＣ Ｕ Ｌ Ｔ Ｕ Ｒ ＥＡ Ｎ ＤＴ Ｈ ＥＰ Ｒ Ｅ Ｌ Ｌ Ｍ Ｉ Ｎ Ａ Ｒ ＹＳ Ｔ Ｕ Ｅ Ｙ０ ＦＣ Ｒ Ｙ Ｏ Ｐ Ｒ Ｅ Ｓ Ｅ Ｒ Ｖ Ａ Ｔ ｌＯ ＮＡ Ｎ ＤＲ Ｅ Ｃ Ｏ Ｖ Ｅ Ｒ ＹＭ Ｅ Ｎ ＧＦ ａ ｎ ｈ ｕ ａ ｌ， Ｄ ＩＤ ｏ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ９ １， Ｈ Ｕ Ａ Ｎ ＧＫ ａ ｉ２（ １． Ｃ ｏ ｌｌｅｇ ｅ矿Ｂ ｉｏ ｌｏ ｇ ｙ Ｅ ｎ ｇ ｉｎ ｅ ｅ ｒ ｉｎ ｇ ， Ｉｎ ｎ ｅ ｒＭ ｏ ｎ ｇ ｏ ｌｉａＡ ｇ ｒｉｃｕ ｌｔｕ ｒａ ｌ晚池瑙缈， Ｈ ｕ ｈ ｈ ｏ ｔ２ ． Ｉｎ ｎ ｅ ｒＭ ｏ ｎ ｇ ｏ ｌｉａ ｂ ｉｇ ｏ ｎｂ ｉｏ ｔｅ ｃ ｈＣ Ｏ ． ， Ｌ Ｔ Ｄ ， ＆ ｛ ｜： ｊｆ， ｌｇ０ １０ ０ １８ ， Ｃ ｈ ｉｎ ａ ；１０ ２６０ ０ ； Ｃ ｈ ｉｎ ａ ）Ａ ｂ ｓｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｔ ｈ ｉｓｒｅｓｅａ ｒｃｈ ａ ｉｍ ｓ ａ ｔ ｆ ｉｓｈｇ ｅ ｒ ｍｐ ｌａ ｓｍ ｐ ｒｅｓｅｒｖ ａ ｔｉｏ ｎ ． Ｆ ｉｒｓｔｌｙ ， ｂ ｙ ｏ ｂ ｓｅｒｖ ｉｎ ｇｔｈ ｅ ｒｅｓｕ ｌｔ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔｈ ｅｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉｍ ｅ ｎ ｔｏ ｆｃｕ ｌｔｕ ｒｉｎ ｇｔｈ ｅｃｅｌｌｓ ｏ ｆ ｅ ｒ ｕ ｃ ｉｓｎｃ ａ ｒ ｐｆ ｉｎｔｉｓｓｕ ｅ ， ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｏ ｌｏ ｇ ｉｃ ａ ｌｆ ｅ ａ ｔｕ ｒ ｅ ｓ ｏ ｆｐ ｒ ｉｍ ａ ｒ ｙｃ ｕ ｌｔｕ ｒ ｅ ｄ ａ ｎ ｄｓｕ ｂ ｃ ｕ ｌｔｕ ｒ ｅ ｄｃ ｅ ｌｌｓｗ ｅ ｒ ｅｅ ｘ ａ ｍ ｉｎ ｅ ｄ ． Ｓ ｅ ｃｏ ｎ ｄ ｌｙ ， ｂ ｙｃａ ｌｃｕ ｌａ ｔｉｏ ｎ ａ ｎ ｄａ ｓｓｅ ｓｓｉｎ ｇｔｈ ｅ ｃｅｌｌ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙｒ ｅｓｕ ｌｔｓ ｏ ｆｓｔｏ ｒ ｉｎ ｇｓｕ ｂ ｃ ｕ ｌｔｕ ｒ ｅ ｄｃ ｅ ｌｌｓｂｙｅｉｔｈ ｅｒｇ ｒ ａ ｄ ｕ ａ ｌｌｙｃ ｏ ｏ ｉｎ ｇｄ ｏ ｗ ｎ ｏ ｒｈ ａ ｎ ｇ ｉｎ ｇｉｎ ｔｈ ｅＵ ｑＩ】 ｉｄｎ ｉｔｒｏ －ｇ ｅ ｎｔａ ｎ ｋ ， ｔｈ ｅｂ ｅｔｔｅｒｃ ｒ ｙ ｏ ｐ ｒ ｅ ｓｅ ｒ ｖ ａ ｔｉｏ ｎｍ ｅ ｔｈ ｏ ｄ ａ ｎ ｄｓｕ ｉｔａ ｂ ｌｅ ａ ｎ ｔｉｆ ｒ ｅ ｅ ｚ ｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ｅｔｅｒｍ ｉｎ ｅｄ ． Ｉｎｔｈ ｅｔｅｓｔ， ｇ ｌｙ ｃｅｒｉｎａ ｎ ｄ Ｄ Ｍ Ｓ Ｏｗ ｅ ｒ ｅ ｕ ｓｅｄ ８ ８ ａ ｎ ｔｉｆ ｒｅｅｚｅ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅｓｕ ｌｔ ｓｈ ｏ ｗ ｓ ｔｈ ａ ｔ ｔｈ ｅ ｃ ｒ ｕ ｃ ｉａ ｎｃ ａ ｒ ｐｆ ｉｎ ｔｉｓｓｕ ｅ ｃｅｌｌｓ ｗ ｅ ｒ ｅｓｕ ｃ ｃ ｅ ｓｓｆ ｕ ｌｌｙｃｕ ｌｔｕ ｒｅｄ ｉｎ ｔｏ ｔｈ ｅ ７ ｔｈｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔｉｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｔｈ ａ ｔ ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｉｓ ａｇ ｒ ｏ ｗ ｉｎ ｇ ｔｅ ｎ ｄ ｅ ｎ ｃ ｙｏ ｆｉｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓｉｎ ｇｆ ｉｂ ｒ ｏ ｂ ｌａ ｓｔ ｗ ｈ ｅ ｎｔｒ ａ ｎ ｓｆ ｅ ｒ ｒ ｉｎ ｇｃｅｌｌｓ． Ｈ ｉｇ ｈ ｅｒｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙｒ ａ ｔｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ａ ｌｓｏｈ ａ ｐ ｐ ｅ ｎ ｅ ｄｗ ｈ ｅ ｎｇ ｒａ ｄ ｕ ａ ｌ ｃｏ ｏ ｌｉｎ ｇｄ ｏ ｗ ｎａ ｎ ｄ Ｄ Ｍ Ｓ Ｏｗ ｅ ｒ ｅｅｍ ｐ ｌｏ ｙ ｅｄ ． Ｔ ｈ ｅｒｅｓｕ ｌｔ ｓｈ ｏ ｗ ｓ ｔｈ ａ ｔ ｔｈ ｅｅ ｍ ｃ ｉａ ｎｃａ ｒ ｐｆ ｉｎ ｔｉｓｓｕ ｅ ｃｅｌｌｓ ｗ ｅ ｒ ｅｓｕ ｃ ｃ ｅ ｓｓｆ ｕ ｌｌｙｃｕ ｌｔｕ ｒｅｄ ｉｎ ｔｏ ｔｈ ｅ７ ｔｈｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔｉｏ ｎａ ｎ ｄｔｈ ａ ｔ ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｉｓ ａｇ ｒｏ ｗ ｉｎ ｇｔｅ ｎ ｄ ｅ ｎ ｃ ｙｏ ｆｉｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓｉｎ ｇｆ ｉｂ ｒ ｏ ｂ ｌａ ｓｔ ｗ ｈ ｅ ｎｔｒａ ｎ ｓｆ ｅｒｒｉｎ ｇ ｃｅｌｌｓ． Ｈ ｉｇ ｈ ｅｒｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙｒ ａ ｔｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ａ ｌｓｏｈ ａ ｐ ｐ ｅｎ ｅｄｗ ｈ ｅ ｎｇ ｒ ａ ｄ ｕ ａ ｌｃ ｏ ｏ ｌｉｎ ｇｄ ｏ ｗ ｎａ ｎ ｄＤ Ｍ Ｓ Ｏｗ ｅ ｒ ｅｅｍ ｐ ｌｏ ｙ ｅｄ ．Ｋ ｅ ｙｗ ｏ ｒ ｄ ｓ：Ｃ ｒ ｕ ｓｉａ ｎｃａ ｒｐ ；Ｆ ｉｎｔｉｓｓｕ ｅ；Ｃ ｕ ｌｔｕ ｒ ｉｎ ｇｔｈ ｅｃｅｌｌｓ； Ｃ ｒ ｙ ｏ ｐ ｒ ｅｓｅｒ ｖ ａ ｔｉｏ ｎ鱼类细胞冻存研究， 对种质保存， 品种改良有重要意义。 随着人口的不断增长， 人类对自然资源的开发强度越来越大， 导致了世界许多珍稀鱼类濒临灭绝， 这一严重情况引起了全世界的关注。 培养的传代细胞利用超低温冻存技术可以无限的保存下去， 这样， 如果现在把濒危鱼类的细胞采用细胞冻存技术保存起来， 利用动物克隆技术就可以有效的恢复和扩大濒危物种的种群数量， 甚至将来可以使濒临灭绝或已经灭绝的物种再现于世。 本文主要从鱼类种质资源保存的目的出发， 对冻存的传代细胞计算复苏率， 找到最适宜的冻存方法与冻存剂。＇收稿日期： ２０ ０ ９ ０ ８ ０ ３作者简介： 孟凡华（ １９ ７ ８一）， 硕士， 讲师， 主要从事水产生物学研究．１材料与方法１． １实验材料幼龄鲫鱼， 来自呼和浩特市东瓦窑菜市场。１． ２取材把鱼放在超净工作台内， 铺上无菌纱布， 用酒精棉球消毒鱼体， 取尾鳍组织先用Ｈ ａ ｎ ｋ ｓ溶液（ 不含胎牛血清）充分浸洗３次， 以除去脂肪、 血细胞等； 再用Ｍ １９ ９ 培养基（ 含２０ ％胎牛血清ｌＯ Ｏ ＩＵ ／ｍ ｌ双抗）洗涤１次， 弃去洗涤液。万方数据